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光是一种电磁波具有一定的波长和频率。可见光的波长范围在400-760nm，紫外光为200-400mm，红外光为70-50000m可见光因波长不同呈现不同颜色，这些波长在-定范围内呈现不同颜色的光称单色光。太阳或钨丝等发出的白光是复合光，是各种单色光的混合光。利用棱镜可将白光分成按波长顺序排列的各种单色光，即红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等，这就是光谱。
有色物质溶液可选择性地吸收一部分可见光的能里而呈现不同颜色，而某些无色物质能特征性地选择紫外光或红外光的能童。物质吸收由光源发出的某些波长的光可形成吸收光谱，由于物质的分子结构不同，对光的吸收能力不同，因此每种物质都有特定的吸收光谱，而且在-定条件下其吸收程度与该物质的浓度成正比，分光光度法就是利用物质的这种吸收特征对不同物质进行定性或定里分析的方法。
分光光度计就是利用分光光度法,通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。不同种类的分光光度计的基本原理相似，都是利用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源。光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，通过测量样品的吸光值，经过计算可以转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
分光光度计在追求准确、快速、可靠的同时，小型化、智能化、 网络化成为了现代分光光度计新的特点和发展点。比如以下对比可以看出：新增加自动波长设定，波长精度:±1nm大幅度提高，彩色触摸屏应用，功能增加（浓度曲线显示、多波长设定）配USB接口等。
常规技术参数：
波长范围:200-1000nm
波长误差:±1nm
波长重复性:≤0.5nm
光谱带宽:2nm
杂散光:0.1%(T)（在220nm处，以NaI测定）（在360nm处，以NaNO2测定）
透射比范围：0.0%-200.0%（T）
透射比准确度：±0.5%（T）
透射比重复性≤0.2%(T)
噪声：100%(T)≤0.2%(T)，0%(T)≤0.1%(T)
漂移≤0.002(A)/0.5h（开机2h后，250nm和500nm处）
基线平直度：±0.003(A)(210-990nm)
简易的操作界面
经典分光光度计使用步骤/方法
1)预热仪器。为使测定稳定，将电源开关打开，使仪器预热20min，为了防止光电管疲劳，不要连续光照。预热仪器时和在不测定时应将比色皿暗箱盖打开，使光路切断。
2)选定波长。根据实验要求，转动波长调节器，使指针指示所需要的单色光波长。
3)固定灵敏度档。根据有色溶液对光的吸收情况，为使吸光度读数为0.2-0.7，选择合适的灵敏度。为此，旋动灵敏度档，使其固定于某一档，在实验过程中不再变动。一般测量固定在“1”档。
4)调节“0”点。轻轻旋动调“0”电位器，使读数表头指针恰好位于透光度为“0”处(此时，比色皿暗箱盖是打开的，光路被切断，光电管不受光照)。
5)调节T=100%。将盛蒸馏水(或空白溶液或纯溶剂)的比色皿放入比色皿座架中的第一格内，有色溶液放在其它格内，把比色皿暗箱盖子轻轻盖上，转动光量调节器，使透光度T=100%，即表头指针恰好指在T=100%处。
6)测定。轻轻拉动比色皿座架拉杆，使有色溶液进入光路，此时表头指针所示为该有色溶液的吸光度A。读数后，打开比色皿暗箱盖。
7)关机。实验完毕，切断电源，将比色皿取出洗净，并将比色皿座架及暗箱用软纸擦净。
注意事项
1)为了防止光电管疲劳。不测定时必须将比色皿暗箱盖打开，使光路切断，以延长光电管使用寿命。
2)比色皿的使用方法：
①拿比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，不要碰比色皿的透光面，以免沾污。
②清洗比色皿时，一般先用水冲洗，再用蒸馏水洗净。如比色皿被有机物沾污，可用盐酸-乙醇混合洗涤液(1∶2)浸泡片刻，再用水冲洗。不能用碱溶液或氧化性强的洗涤液洗比色皿，以免损坏。也不能用毛刷清洗比色皿，以免损伤它的透光面。每次做完实验时，应立即洗净比色皿。
③比色皿外壁的水用擦镜纸或细软的吸水纸吸干，以保护透光面。
④测定有色溶液吸光度时，一定要用有色溶液洗比色皿内壁几次，以免改变有色溶液的浓度。另外，在测定一系列溶液的吸光度时，通常都按由稀到浓的顺序测定，以减小测量误差。
⑤在实际分析工作中，通常根据溶液浓度的不同，选用液槽厚度不同的比色皿，使溶液的吸光度控制在0.2～0.7。
被测溶液很少或者很珍贵情况下
微量比色皿是一种由铝和石英玻璃制成的高质量比色皿。 它是对微量高浓度样品进行测量的完美工具。 超微量比色皿其光程长度为1mm，仅为普通比色皿光程长度的十分之一。 这种比色皿特别适用于高浓度核酸和蛋白质样品的检测，无需稀释样品即可得到高度可重复性结果。由于石英玻璃上的疏水性涂层，只需 1.5 µL 核酸或 3 µL 蛋白样品即可形成液柱。微量比色皿的背景吸光度很低，可保证较宽的样品检测范围。此外只需5µL 样品溶液即可进行特定荧光检测，可节省试剂。
一般情况下，样品浓度越低，光程长度应越长。朗伯比尔定律表明，如果样品的浓度非常高，所用的光程长度应该缩短，以确保足够的光能透过样品到达检测器。对于浓度高于25ng/µL的dsDNA 样品，建议使用等于或短于1 mm 的光程长度进行微量检测。
利用比色皿进行浓度测定时，通过样品特定的消光系数和光程长度进行计算是最为常用的方法。 对于常规比色皿，光程长度取决于比色皿的宽度，因为光是水平透过比色皿的。 当使用 超微量比色皿时，上下两部分的距离决定了光程长度。 因此，浓度的检测和换算和常规比色皿相同。
部分相关应用
1.核酸定量检测
2.蛋白质直接定量检测 (UV 280nm)
3.通过微量比色皿对高浓度样品进行微量检测
4.细菌生长测定 (OD600)
5.通过比色法进行蛋白质定量测定，例如 BCA、Bradford、Lowry 法
6.340 nm： NADPH 或 NADH 测定
7.405 nm： 对硝基苯酚测定
8.490 nm： 细胞毒性测定
9.透光度测定
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